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维生素C检测试剂盒(菲咯啉微板法)主要用于植物组织中的维生素C含量的检测。

在酸性条件下，维生素C把三价铁离子还原成亚铁离子，后者与菲咯啉形成稳定的红色螯合物，以酶标仪534nm处检测吸光度，在一定浓度范围(样品浓度控制在0.5～35μg/mL)吸光度与维生素C含量呈线性关系，获得Vitamin C含量。

• 反应稳定，不易褪色；
  
• 灵敏度高；
  
• 还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，因此专一性好。

• 蒸馏水、无水乙醇
  
• 研钵或匀浆器、离心机、离心管、试管
  
• 96孔板、酶标仪、恒温箱或水浴锅

• 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 组织匀浆液有腐蚀性，应小心操作，避免直接接触。
  
• 加样后反应不完全，因此不能立即测定，一般情况下60min内即可充分反应，应当在60～120min内测定完成。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 稀释组织匀浆液：按5×组织匀浆液∶蒸馏水＝1∶4的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
  
• 准备样品：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量2～3g，加入研磨器内，再加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50mL离心管，补充1×组织匀浆液至22mL，充分混匀，4000g离心5min，上清液即为待测液。
  
• 配制系列Vitamin C标准：将25mg Vitamin C标准用1mL 1×组织匀浆液溶解即得Vitamin C标准(25mg/mL)，再用1×组织匀浆液稀释成Vitamin C标准(50μg/mL)，取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。配制好的Vitamin C标准(25mg/mL)放置-20℃，短期保存。
  

  加入物(μL)	1	2	3	4	5	6
  Vitamin C标准(50μg/mL)	4	10	16	20	40	60
  1×组织匀浆液	96	90	84	80	60	40
  相当于Vitamin C含量(μg)	2	5	8	10	20	30

• 加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的Vitamin C含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2~3平行孔，求平均值。
  

  加入物(μL)	空白孔	标准孔	测定孔
  1×组织匀浆液	100	－	－
  系列Vitamin C标准(1～6号)	－	100	－
  待测液	－	－	100
  无水乙醇	50	50	50
  混匀
  酸性缓冲液	25	25	25
  菲咯啉显色液	50	50	50
  Vitamin C Assay Buffer	25	25	25

• Vitamin C测定：混匀，30℃温箱中反应60min，以空白调零，酶标仪测定534nm处系列标准管、测定管的吸光度。